Información Técnica y Comercial de los Reactivos para elisa

ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) es una técnica que se basa en el uso de anticuerpos (Ab) o antígenos (Ag) marcados (enzimáticamente) de forma que la reacción inmunológica pueda ser detectada por la acción enzimática. Uno de los dos componentes (Ag o Ab) se fija a un soporte, de tal manera que la reacción antígeno-anticuerpo quede fija y sea posible revelarla mediante la adición de un substrato especifico que al actuar la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro.

Cada tipo de ELISA requiere de reactivos diferentes; pero en general los más utilizados son:
Inmunoabsorbente: Placas de poliestireno capaces de reaccionar con grupos amino y con ello unir el anticuerpo o antígeno.
Agentes de bloque: Compuestos utilizados para bloquear posibles sitios libre en el soporte, ej. detergentes (tween), proteínas (albúmina, caseína), etc.
Enzima: Las enzimas mayormente utilizadas son la peroxidasa de rábano, fosfatas alcalina y ß-galactosidasa.
Sustrato: se utiliza la molécula que la enzima convierte en un producto cuantificable por espectrofotometría de luz U.V. o luz visible.
Anticuerpos y antígenos: Moléculas que reacción entre sí para formar complejos específicos.
También se utiliza solución de lavado (Tween, ClNa y agua destilada), amortiguadores de pH , soluciones para detener la reacción (H ₂ SO ₄ ), etc.

Se utiliza en:
Diagnóstico de infecciones por virus, bacterias, protozoarios, tanto en animales como en plantas. Se utiliza también es cuantificación de hormonas, anticuerpos (enfermedades autoinmunes, diagnóstico, tratamiento, monitoreo), etc.

De acuerdo al analito marcado:
Anticuerpos marcados: ELISA directo, indirecto y sándwich.
Antígeno marcado: ELISA competitivo.

Los pasos a seguir en la realización de ELISA son:
1. Tapizado del pocillo con el antígeno o anticuerpo.
2. Adición de la muestra problema con la mezcla de antígenos o anticuerpos.
3. Unión del antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno tapizado en el pocillo.
4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de antígeno o anticuerpo no unido.
5. Adición del anticuerpo secundario marcado con la enzima.
6. Unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo.
7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida.
8. Adición del substrato.
9. Unión del substrato a la enzima.
10. Desarrollo del color.